日本受精着床学会(横浜）

Cryoloopを用いたVitrification法による胚盤胞凍結の臨床成績（富山達大）

• 目的

  近年多胎の防止や反復ART不成功例の妊娠率向上を目的としての胚盤胞移植法により、高い臨床成績が報告されている。しかし余剰胚盤胞凍結・胚移植では同様な臨床成績は報告されていない。我々は極少量の凍結保護液によるFlash Freezingを可能にした画期的凍結法であるCryoloopを用いた超急速Vitrification法で、妊娠出産例と高い臨床成績を得たので報告する。

• 方法

  上記3施設において反復ART不成功の対策として行った胚盤胞移植後、凍結可能な余剰胚盤胞が有り、Consentを得られた34例の患者の胚盤胞に Cryoloop法による超急速Vitrificationを行った。手順はEthylene GlycolとDMSOがそれぞれ7.5％（平衝化液.2min.）、15％（ガラス化液,30sec）に0.65M Sucroseを加えた凍結保護液に胚盤胞を浸した後（37℃）、ナイロンループ（太さ20μm、直径0.5～0.7mm）にて構成された Cryoloopに、極少量のガラス化液と共に凍結胚を載せ、液体窒素に直接浸す、超急速凍結を行った。解凍は37℃、0.25 M Sucrose液に直接ループ部分を浸し超急速解凍した。胚移植はエストロゲン・プロゲステロン投与による子宮内膜作成周期にて解凍当日に解凍後再拡大の見られた胚盤胞を移植し、心拍確認ができた症例のみ妊娠と判定した。

• 結果

  34症例において108個の胚盤胞を解凍し、70個が生存し（65％）、31例において移植したところ15例において妊娠が確認され（48％）、2例が既に出産し、4例が流産に終わり、9例が継続中である。胚盤胞凍結日が採卵後5日目か6日目においては8例/11例、7例/23例と5日目に凍結できた症例が有意に良い結果となった（p＜0.05）。

• 考察

  Cryoloop法における胚盤胞凍結の最初の妊娠出産例報告であり、Cryoloop法を用いることで氷晶形成時間を与えないほど超急速に凍結が可能となり、凍結保護剤が比較的入りにくく困難と考えられていた胚盤胞の凍結が可能となった。従来のSlow coolingによる凍結より良い成績が得られ、胞胚腔の拡大に到っていない5日目の胚盤胞の方が凍結生存性の面で良い事も示唆された。